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DMEM/F12（Dulbecco's Modified Eagle Medium/Nutrient Mixture F-12）是一种复合型培养基，结合了DMEM的高营养与Ham's F12的丰富组分，广泛应用于原代细胞培养、干细胞研究及3D类器官培养。
1. 特点与核心优势
关键特性
营养全面性：
整合DMEM的高氨基酸/维生素与F12的微量元素（如锌、腐胺、亚油酸）。
适合低血清或无血清培养（减少对FBS的依赖）。
缓冲能力强：
含较高浓度的HEPES（某些版本）和NaHCO₃，适应不同CO₂条件。
典型应用
| 细胞类型 | 应用场景 |
|---|---|
| 原代细胞（肝、肾、肺） | 原代分离与扩增 |
| 干细胞（类器官、MSCs） | 无血清培养、分化诱导 |
| 肿瘤细胞（PDX模型） | 患者来源肿瘤组织培养 |
| 神经细胞 | 与Neurobasal混合用于神经元培养 |
2. 核心成分解析
基础组分
能量源：
葡萄糖（1.0-3.15 g/L，不同版本），丙酮酸钠（常见1 mM）。
氨基酸：
含L-谷氨酰胺（部分版本需补充），非必需氨基酸（NEAA）。
特殊添加：
腐胺（促进某些上皮细胞生长）、锌（酶辅因子）、亚油酸（膜合成）。
常见添加剂方案
| 用途 | 添加剂组合 |
|---|---|
| 原代细胞扩增 | 10% FBS + 1% NEAA + 2 mM Glutamax |
| 无血清干细胞培养 | B27/N2 + 20 ng/mL bFGF + 1% ITS |
| 类器官培养 | R-spondin + Noggin + EGF（需Matrigel支持） |
3. 与其他培养基的对比
| 参数 | DMEM/F12 | DMEM高糖 | RPMI-1640 |
|---|---|---|---|
| 营养复杂度 | 极高（含F12特有成分） | 高 | 中（侧重悬浮细胞） |
| 血清需求 | 可低至2%或无血清 | 通常需10% | 5-10% |
| 典型应用 | 原代细胞、类器官 | 肿瘤细胞系 | 淋巴细胞、杂交瘤 |
4. 关键实验方案
（1）原代肝细胞培养
培养基配方：
DMEM/F12 + 10% FBS + 1% NEAA + 10 mM HEPES + 1% Pen/Strep
培养条件：
胶原蛋白包被培养皿，37°C/5% CO₂，每2天换液。
（2）类器官培养（肠/肺）
无血清方案：
DMEM/F12 + 1× B27 + 1.25 mM N-Acetylcysteine + 生长因子（如EGF, Wnt3a）
需嵌入Matrigel中3D培养。
5. 常见问题与优化
Q1: DMEM/F12能否完全替代DMEM或F12？
可以，但需注意：
某些细胞（如HEK293）在DMEM中增殖更快，而F12单独使用可能营养不足。
最佳实践：通过细胞生长曲线测试适配性。
Q2: 无血清培养出现细胞死亡怎么办？
逐步适应：
先用含5% FBS的DMEM/F12培养；
每代降低血清比例，同时添加ITS（胰岛素-转铁蛋白-硒）。
Q3: 沉淀问题如何解决？
磷酸盐沉淀：
4°C储存前过滤（0.22 μm），使用前37°C预热混匀。
避免培养基中Ca²⁺/PO₄³⁻过高（如减少血清比例）。