3T3-L1是一种来源于瑞士小鼠胚胎的成纤维细胞系,具有在特定诱导剂作用下分化为脂肪细胞的能力,是研究脂肪生成、肥胖、胰岛素抵抗和相关代谢疾病的金标准模型。
增殖期:细胞呈长梭形,成纤维细胞样。
分化后:细胞变圆,胞内开始积累脂滴(可用油红O染色),表现出成熟脂肪细胞的特性。
3T3-L1细胞完全培养基含有血清和双抗,如无特别需要不用额外再添加血清和双抗,可以直接使用。为保持本产品的最佳使用效果,不宜将其长时间放置于室温或较高的温度环境中。本产品只供进一步科研使用,不可应用于临床等其他方面。
血清批次:不同批次的FBS对细胞生长和分化效率影响巨大。进行重要实验前,务必测试并选定一个批次的血清,并一次性购买足量。
细胞代次:使用低代次的细胞(如< passage 20)。代次过高会导致分化能力显著下降。
融合度是关键:诱导开始时,细胞必须达到100%融合并维持一段时间,这是触发分化的先决条件。未完全融合的细胞不会有效分化。
诱导剂配制:
IBMX:用DMSO溶解配制成高浓度储存液(如100 mM),-20°C避光保存。
地塞米松:用乙醇或DMSO溶解配制成高浓度储存液(如1 mM),-20°C保存。
胰岛素:用稀盐酸(如0.01 M HCl)或无菌水溶解配制成储存液(如1 mg/mL),4°C保存。
污染风险:分化过程长达10天以上,期间多次换液,务必严格无菌操作。
分化验证:通过油红O(Oil Red O)染色来可视化胞内脂滴,并通过qPCR检测脂肪细胞标志物(如PPARγ, C/EBPα, FABP4/aP2, Adiponectin)的mRNA表达水平来定量评估分化效率。