4T1细胞完全培养基

培养与传代

1. 培养条件：

   • 温度：37°C

   • 气体：5% CO₂

   • 湿度：饱和湿度

2. 传代：

   • 消化：移除旧培养基，用PBS轻柔洗涤一次。加入适量0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液，室温或37°C消化1-3分钟。镜下观察细胞变圆、间隙增大后即可终止。

   • 终止：加入2倍于胰蛋白酶体积的完全培养基（其中的FBS可以抑制胰蛋白酶活性）来终止消化。

   • 吹打与计数：轻轻吹打形成单细胞悬液，进行细胞计数。

   • 接种：按1:5至1:10的比例进行传代接种（根据实验需求调整密度）。4T1生长速度快，通常1-2天即可传代一次。

     
     

   1. 冻存：

      • 使用生长旺盛、处于对数生长期的细胞。

      • 冻存液配方：90% 完全培养基 + 10% DMSO。

      • 程序性降温后，液氮中长期保存。

   注意事项

   1. 生物安全等级：4T1细胞来源于小鼠，需在BSL-1或BSL-2实验室操作（根据不同机构的规定）。操作时需穿戴实验服和手套，所有废弃物应作为生物危险废物处理。

   2. 形态观察：4T1细胞形态不均一，同时存在上皮样和纺锤形细胞，这是其正常特征，无需担心。

   3. ** Mycoplasma 污染**：4T1细胞易受支原体污染，需定期进行支原体检测。

   4. 体内接种：用于小鼠成瘤实验时，通常使用无血清培养基或PBS重悬细胞，以避免血清中的异源蛋白引起免疫反应。

   5. 血清批次：不同批次的FBS对细胞生长速度有影响。进行关键实验（如体内成瘤实验）前，最好测试并固定一个批次的血清。