一抗二抗洗脱液

一、洗脱原理

1. 作用机制

   • 变性洗脱：通过破坏抗原-抗体间的非共价键（氢键、疏水作用等），常用SDS和β-巯基乙醇。

   • 温和洗脱：调整pH或离子强度（如甘氨酸缓冲液），可保留膜/抗原活性用于重复检测。

2. 适用场景

   • Western Blot膜再生：同一膜检测不同靶蛋白

   • 抗体去除：一抗/二抗结合不理想时

关键注意事项

1. 洗脱效果验证

   • 洗脱后膜用ECL显色，确认无残留信号

   • 推荐对照：保留未洗脱区域对比

2. 膜与抗原保护

   风险	解决方案
   膜破损	使用PVDF膜（耐高温/酸碱）
   抗原丢失	避免多次洗脱（≤3次）
   背景升高	洗脱后延长封闭时间

3. 抗体兼容性

   • 难洗脱抗体：磷酸化抗体、多克隆抗体需延长洗脱时间

   • 不建议洗脱：生物素化抗体（链霉亲和素结合不可逆）