IP裂解液(Immunoprecipitation Lysis Buffer)是用于免疫共沉淀(Co-IP)或染色质免疫沉淀(ChIP)等实验的关键试剂,其主要目的是裂解细胞或组织,释放目标蛋白或核酸,同时保持蛋白的天然结构和相互作用。
裂解条件:冰上操作,裂解时间通常为15-30分钟,避免过度裂解导致蛋白降解。
离心:4℃高速离心(12,000-14,000 rpm,10-15分钟)去除不溶物。
抗体孵育:裂解液需与抗体、磁珠/琼脂糖珠孵育以捕获目标蛋白复合物。
对照设置:建议使用IgG或空载体裂解液作为阴性对照。
高背景:降低去垢剂浓度或增加盐浓度(如NaCl至300 mM)。
低效裂解:增加裂解液强度(如添加SDS)或延长裂解时间。
蛋白降解:确保抑制剂新鲜添加,全程低温操作。