磷钨酸苏木素(PTAH)染色是横纹肌特异性染色的金标准,其独特的多色性染色机制:
复合染料作用
苏木素与磷钨酸形成络合物
选择性结合肌纤维的肌球蛋白和Z线结构
染色结果:
横纹肌纤维:深蓝色(纵纹)与紫红色(横纹)交替
胶原纤维:棕红色
神经胶质:紫色
氧化-媒染作用
磷钨酸同时作为氧化剂和媒染剂
促进染料与肌纤维的稳定结合
试剂盒核心组分:
PTAH工作液(含0.1%苏木素+2%磷钨酸)
酸性分化液(0.5%盐酸乙醇)
蓝化液(0.2%氨水)
正常肌纤维
明暗相间横纹(间距约2.5μm)
心肌:分支状排列,闰盘深染
骨骼肌:平行排列,横纹显著
病理改变特征
肌浆溶解:横纹消失伴淡染
坏死肌纤维:均质红染
再生纤维:嗜碱性胞质
常见问题解决方案
| 问题现象 | 可能原因 | 修正方案 |
|---|---|---|
| 横纹不清晰 | 固定不当/染色不足 | 改用Bouin液固定,延长染色至24h |
| 背景过深 | 分化不足 | 增加盐酸乙醇分化至20s |
| 肌纤维断裂 | 切片过厚 | 调整切片厚度至3-4μm |