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尼氏染色是一种经典的神经组织学染色方法，主要用于显示神经元内的尼氏体（Nissl bodies），即粗面内质网和游离核糖体组成的嗜碱性颗粒。其原理基于：
碱性染料（如焦油紫、甲苯胺蓝、硫堇）与尼氏体中的RNA和酸性蛋白结合，呈现深蓝色或紫色。
细胞核也被染色，但颜色较浅，与尼氏体形成对比。
染色结果：
尼氏体：深蓝色/紫色颗粒（分布于胞质，核周明显）
细胞核：浅蓝色
神经纤维网：不着色或淡染
常见问题及解决方案
| 问题 | 可能原因 | 解决方案 |
|---|---|---|
| 尼氏体染色浅 | RNA降解/染色时间不足 | 缩短固定时间，延长染色 |
| 背景过深 | 分化不足或染液浓度过高 | 优化分化时间，稀释染液 |
| 切片褪色快 | 脱水不彻底或封片不当 | 严格脱水步骤，使用中性树胶封片 |
| 非特异性染色 | 染料pH异常（需pH 3.5~4.5） | 调整染液pH或用缓冲液配制 |
1. 样本准备
组织固定：10%中性福尔马林或4%多聚甲醛固定24~48小时。
切片：石蜡或冰冻切片（厚度10~20μm），贴附于载玻片。
2. 染色流程
脱蜡至水（石蜡切片）：
二甲苯→100%乙醇→95%→70%→蒸馏水，每级5分钟。
染色：
焦油紫（0.1%~1%）或甲苯胺蓝染液浸染10~20分钟（室温）。
水洗：
蒸馏水快速冲洗，去除浮色。
分化：
95%乙醇或乙酸酒精分化数秒（镜下控制至背景透明、尼氏体清晰）。
脱水透明：
100%乙醇→二甲苯，每级2分钟。
封片：
中性树胶封片。
3. 镜检结果
正常神经元：胞质内布满深色尼氏体，核淡染。
受损神经元：尼氏体溶解或减少（染色浅淡）。
注意事项
1. 样本处理
固定时间：过长固定（>1周）可能导致RNA降解，减弱染色。
切片厚度：过薄（<10μm）尼氏体显示不完整；过厚（>20μm）易染色不均。
2. 染色控制
染色时间：
过度染色（>30分钟）会导致背景过深，需延长分化时间。
分化关键：
分化不足→背景残留；过度分化→尼氏体褪色。建议镜下实时监控。
3. 试剂保存
焦油紫/甲苯胺蓝：避光保存，4℃稳定3~6个月。
分化液：现用现配（乙酸酒精易挥发）。