免疫组化试剂盒(抗小鼠二抗)

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产品名称 免疫组化试剂盒(抗小鼠二抗)
产品货号 PM0124
产品规格 100T
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产品详情实验步骤说明书下载

免疫组化(IHC)通过级联放大系统实现靶蛋白可视化:

  1. 三明治结构
    小鼠源一抗抗小鼠二抗(酶标记) → 显色底物

    • 二抗常见标记:

      • HRP(辣根过氧化物酶):DAB显色(棕)

      • AP(碱性磷酸酶):Fast Red显色(红)

    • 信号放大技术:

      • 生物素-链霉亲和素(B-SA)系统

      • 聚合物偶联(如EnVision™)

  2. 特异性保障

    • 二抗经过种属吸附处理(抗兔/大鼠IgG吸附)

    • 内源性IgG阻断剂(减少非特异结合)

试剂盒组成

  1. 抗小鼠HRP聚合物二抗

  2. DAB显色套装

  3. 内源性过氧化物酶阻断剂

  4. 抗原修复液(pH6.0/9.0)

试剂管理与安全

  1. 稳定性控制

    • 二抗:4℃避光保存(HRP标记物禁止冻存)

    • DAB浓缩液:-20℃分装(避免反复冻融)

  2. 生物安全

    • DAB废液处理:

      1. 用10%次氯酸钠氧化

      2. 按有害化学废液处置

    • 含叠氮钠试剂:严禁与铜/铅接触(易爆炸)


关键参数优化

步骤优化要点
抗原修复膜蛋白推荐EDTA(pH9.0)修复
二抗稀释通常1:100-1:200(需预实验滴定)
显色控制肺癌等富抗原组织显色时间减半


注意事项

  1. 对照设置(必做)

    • 阳性对照:已知阳性组织(如CD3阳性的淋巴组织)

    • 阴性对照

      • 空白对照(PBS替代一抗)

      • 同型对照(小鼠IgG1κ)

  2. 常见问题排错

    问题现象可能原因解决方案
    全片着色二抗浓度过高提高稀释比至1:500
    背景颗粒组织干燥保持样本湿润
    信号弱修复不足改用高压修复121℃ 10min

结果判读标准

评分染色特征临床意义
0无着色阴性
1+微弱染色临界值
2+中度染色阳性
3+强染色高表达


亚细胞定位

  • 核(如p53)

  • 胞质(如CD68)

  • 膜(如CD20)