PAS染色(Periodic Acid-Schiff Stain) 是一种特异性显示 多糖、糖蛋白、糖脂和黏蛋白 的组织化学染色方法,广泛应用于病理学(如糖原贮积病、真菌感染)和生物学研究。
染色机制:
过碘酸氧化:
过碘酸(HIO₄)氧化糖类中的 邻二羟基 为 醛基。
Schiff试剂反应:
醛基与Schiff试剂(无色品红)结合,形成 紫红色沉淀。
复染(可选):
苏木素或甲基绿复染细胞核,增强对比度。
染色结果:
糖原、黏液、基底膜、真菌细胞壁:紫红色
细胞核:蓝色(苏木素复染后)
背景:浅粉色或无着色
| 问题 | 可能原因 | 解决方案 |
|---|---|---|
| 无紫红色阳性信号 | 过碘酸失效/Schiff试剂失效 | 更换试剂,延长氧化或染色时间 |
| 背景过深 | Schiff试剂污染或未充分洗涤 | 严格避光操作,延长亚硫酸氢钠洗涤时间 |
| 非特异性染色 | 醛基残留(如福尔马林固定) | 增加亚硫酸氢钠洗涤或改用乙醇固定 |
| 切片脱落 | 脱蜡不彻底或载玻片未包被 | 优化脱蜡步骤,使用多聚赖氨酸载玻片 |
组织固定:10%中性福尔马林或乙醇固定(糖原需乙醇固定避免溶解)。
石蜡切片:4~5μm厚度,60℃烘片1小时。
脱蜡至水:
二甲苯→梯度乙醇→蒸馏水,每级5分钟。
过碘酸氧化:
1%过碘酸浸泡5~10分钟→蒸馏水冲洗2分钟。
Schiff试剂反应:
Schiff试剂避光浸染15~30分钟(室温)。
洗涤:
亚硫酸氢钠溶液(或流水)冲洗3次,每次2分钟→流水冲洗10分钟。
复染(可选):
苏木素染核1~2分钟→流水蓝化10分钟。
脱水透明:
梯度乙醇→二甲苯,每级2分钟。
封片:中性树胶封片。
阳性物质(糖原、真菌等):紫红色
细胞核:蓝色(复染后)
阴性组织:无色或淡粉色
糖原保存:需用 无水乙醇固定(福尔马林会溶解糖原)。
避免污染:操作中防止唾液或汗液污染(含糖原)。
过碘酸时间:
过短(<5分钟)→氧化不彻底,假阴性;
过长(>15分钟)→组织损伤。
Schiff试剂:
避光保存,变红即失效(应为无色或淡黄色)。
Schiff试剂:4℃避光保存,有效期3~6个月。
过碘酸:现用现配或分装避光保存(易分解)。