Masson三色染色（Masson's Trichrome Stain）是一种结缔组织多色染色法，通过不同染料组合区分胶原纤维、肌纤维和细胞核，广泛用于病理学（如纤维化、肿瘤间质分析）和生物学研究。
染色机制：
核染色（红色）：
使用Weigert铁苏木素或明矾苏木素，使细胞核呈深蓝黑色。
胞质/肌纤维染色（红色）：
丽春红（Ponceau S）或酸性品红与肌纤维、胞质结合，呈红色。
胶原纤维染色（蓝色/绿色）：
苯胺蓝或亮绿选择性染胶原纤维，与酸性染料形成对比。
分化与媒染：
磷钼酸/磷钨酸溶液分化并媒染，增强染料选择性。
染色结果：
胶原纤维：蓝色或绿色（取决于苯胺蓝或亮绿）
肌纤维/胞质：红色
细胞核：深蓝黑色
试剂盒通常包含：
核染液（Weigert苏木素）
丽春红-酸性品红染液
磷钼酸/磷钨酸溶液
苯胺蓝或亮绿染液
分化液（1%冰醋酸）
注意事项
1. 染色控制
核染色：苏木素过度染色会导致背景过深，需严格分化。
磷钼酸分化：是关键步骤，需镜下监控至胶原纤维接近无色。
苯胺蓝时间：过长会掩盖红色成分，建议2~5分钟。
2. 试剂保存
Weigert苏木素：现配现用或分装避光保存（1个月内有效）。
酸性品红：易氧化，4℃避光保存。
3. 样本处理
固定时间：过长固定（>48小时）可能减弱染色效果。
切片厚度：4~5μm最佳，过厚易染色不均。
常见问题及解决方案
| 问题 | 可能原因 | 解决方案 |
|---|---|---|
| 胶原纤维不着色 | 磷钼酸分化过度/苯胺蓝失效 | 缩短分化时间，更换苯胺蓝 |
| 肌纤维与胶原颜色混淆 | 分化不足 | 延长磷钼酸处理时间，镜下监控 |
| 核染色过浅 | 苏木素失效或染色时间不足 | 延长核染色时间或更换染液 |
| 背景脏 | 水洗不充分或脱蜡不彻底 | 加强流水冲洗，优化脱蜡步骤 |
1. 样本准备
组织固定：10%中性福尔马林固定24小时，石蜡包埋。
切片：4~5μm厚度，60℃烘片1小时。
2. 染色流程
脱蜡至水：
二甲苯Ⅰ、Ⅱ各10分钟→梯度乙醇（100%→95%→80%→70%）→蒸馏水。
核染色：
Weigert苏木素染5~10分钟→流水冲洗10分钟→分化（1%盐酸乙醇1秒）→蓝化（流水或弱碱液）。
胞质染色：
丽春红-酸性品红染5~10分钟→蒸馏水稍洗。
分化与媒染：
磷钼酸/磷钨酸处理5~10分钟（镜下控制至肌纤维红色、胶原纤维无色）。
胶原染色：
苯胺蓝或亮绿染2~5分钟→1%冰醋酸分化10秒。
脱水透明：
95%乙醇→100%乙醇→二甲苯，每级2分钟。
封片：中性树胶封片。
3. 镜检结果
胶原纤维：蓝色（苯胺蓝）或绿色（亮绿）
肌纤维/胞质：红色
细胞核：深蓝黑色