HE染色（苏木精-伊红染色）是组织学和病理学中最基础、应用最广泛的染色方法，用于清晰显示细胞核和细胞质的形态结构。
染色原理
苏木精（Hematoxylin）
核染色：氧化后的苏木红（Hematein）在媒染剂（如铝离子）作用下，与细胞核内的DNA/RNA结合，呈蓝色至紫蓝色。
特点：碱性染料，特异性结合酸性结构（如核酸）。
伊红（Eosin）
胞质染色：与细胞质中的碱性蛋白（如胶原、线粒体）结合，呈粉红色至红色。
特点：酸性染料，染色背景清晰。
染色结果：
细胞核：深蓝色
细胞质/纤维：粉红色
红细胞：亮红色
试剂盒通常包含：
Harris或Mayer苏木精染液
伊红染液（水溶性或醇溶性）
分化液（1%盐酸乙醇）
蓝化液（Scott液或缓冲液）
脱水透明试剂（乙醇、二甲苯）
常见问题及解决方案
| 问题 | 可能原因 | 解决方案 |
|---|---|---|
| 核染色浅 | 染液失效/分化过度 | 更换苏木精或缩短分化时间 |
| 背景泛蓝 | 分化不足/水洗不充分 | 加强分化，延长流水冲洗 |
| 伊红不着色 | 染液pH异常（需pH 4.5~5.0） | 调整伊红pH或用醇溶性伊红 |
| 切片龟裂 | 脱水不彻底或透明过度 | 优化乙醇梯度，控制二甲苯时间 |
总结
核心应用：病理诊断、科研组织形态分析。
关键点：
苏木精分化是染色成败的核心步骤。
蓝化不足会导致核呈灰紫色（需碱性水冲洗）。
替代方案：
快速HE试剂盒：简化步骤，适用于术中冰冻切片。
自动化染色机：提高批次一致性。
提示：不同组织（如脂肪、肝）需调整染色时间，建议首次实验设置对照片！
1. 样本准备
组织固定：4%多聚甲醛或10%中性福尔马林固定24小时。
石蜡包埋与切片：切3~5μm厚度，60℃烘片30分钟。
2. 染色流程
脱蜡至水：
二甲苯Ⅰ、Ⅱ各10分钟→100%乙醇→95%→80%→70%→蒸馏水，每级5分钟。
苏木精染色：
浸染3~8分钟（镜下控制核着色程度）。
水洗：流水冲洗5分钟。
分化：1%盐酸乙醇分化1~3秒（立即水洗终止）。
蓝化：流水冲洗15分钟或Scott液30秒。
伊红复染：0.5%伊红染30秒~1分钟（水溶性需快速脱水）。
脱水透明：
梯度乙醇（80%→95%→100%）→二甲苯，每级2分钟。
注意事项
1. 染色控制
苏木精时间：
过度染色（>10分钟）需延长分化时间。
分化关键：镜下监控至核清晰、背景无色。
伊红时间：过长会导致胞质过染，掩盖核结构。
2. 试剂保存
苏木精：避光保存，出现沉淀需过滤。
伊红：醇溶性更稳定，水溶性易滋生微生物。
3. 样本处理
固定时间：过长（>48小时）降低核染色强度。
切片厚度：3~5μm最佳，过厚易染色不均。